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血清學試驗

　　血清學反應是指：相應的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。在食品微生物檢驗中，常用血清學反應來鑒定分離到的細菌，以zui終確認檢測結(jié)果。

　　血清學反應的一般特點：

　　1） 抗原體的結(jié)合具有特異性，當有共同抗原體存在時，會出現(xiàn)交叉反應。

　　2） 抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合雖相當穩(wěn)定，但是可逆的。

　　3） 抗原體的結(jié)合是按一定比例進行的，只有比例適當時，才能出現(xiàn)可見反應。

　　4） 血清學反應大體分為兩個階段進行，但其間無嚴格界限。*階段為抗原體特異性結(jié)合階段，反應速度很快，只需幾秒至幾分鐘反應即可完畢，但不出現(xiàn)肉眼可見現(xiàn)象。第二階段為抗原體反應的可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補體結(jié)合反應等。反應速度慢，需幾分、幾十分以至更長時間。而且，在第二階段反應中，電解質(zhì)、PH、溫度等環(huán)境因素的變化，都直接影響血清學反應的結(jié)果。

　　習慣上將經(jīng)典的血清學反應分三種類別：凝集反應、沉淀反應和補體結(jié)合反應。

1、凝集反應

　　顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應（Agglutination reaction）。其中的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。在該反應中，因為單位體積抗體量大，做定量實驗時，應稀釋抗體。

　　1） 直接凝集反應

　　顆粒性抗原與相應抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應，稱為直接凝集反應（Direct agglution reaction）。

　　a.玻片凝集法。是一種常規(guī)的定性試驗方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。常用于鑒定菌種、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即陽性反應，證明該菌是痢疾桿菌。此法快速、簡便，但不能進行定量測定。
　　b.試管凝集法。是一種定量試驗方法。多用已知抗原來檢測血清中有無相應抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進行流行病學調(diào)查。如肥達氏反應就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗。因為要測定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小時觀察，血清zui高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價。

　　2） 間接凝集反應

　　將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無關的，顆粒狀微球表面，然后與相應抗體（抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應（Indirect agglutination）。由于載體增大了可溶性抗原的反應面積。當載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見的反應，敏感性很高。

2、沉淀反應

　　可溶性抗原與相應抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應（Precipitation）。反應中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過剩，故應稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應的效價。

　　1） 環(huán)狀沉淀反應：是一種定性試驗方法，可用已知抗體檢測未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原與抗體對應，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)。

　　2） 絮狀沉淀反應：將已知抗原與抗體在試管（如凹玻片）內(nèi)混勻，如抗原抗體對應，而又二者比例適當時，會出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀，此為陽性反應。

　　3） 瓊脂擴散試驗：利用可溶性抗原抗體在半固體瓊脂內(nèi)擴散，若抗原抗體對應，且二者比例合適，在其擴散的某一部分就會出現(xiàn)白色的沉淀線。每對抗原抗體可形成一條沉淀線。有幾對抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線。瓊脂擴散可分為單向擴散和雙向擴散兩種類型。單向擴散是一種定量試驗?？捎糜诿庖叩鞍缀康臏y定。而雙向擴散多用于定性試驗。由于方法簡便易行，常用于測定分析和鑒定復雜的抗原成分。

3、補體結(jié)合反應

　　補體結(jié)合反應（Complement fixation reaction）是在補體參與下，以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應。補體無特異性，能與任何一組抗原抗體復合物結(jié)合而引起反應。如果補體與綿羊紅細胞、溶血素的復合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果與細菌及相應抗體復合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。因此，整個試驗需要有補體、待檢系統(tǒng)（已知抗體或抗原、未知抗原或抗體）及指示系統(tǒng)（綿羊細胞和溶血素）五種成份參加。其試驗原理是補體不單獨和抗原或抗體結(jié)合。如果出現(xiàn)溶菌，是補體與待檢系統(tǒng)結(jié)合的結(jié)果，說明抗原抗體是相對應的，如果出現(xiàn)溶血，說明抗原抗體不相對應。此反應操作復雜，敏感性高，特異性強，能測出少量抗原和抗體，所以應用范圍較廣。