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2017年ELISA試劑盒加樣流程
更新時間:2017-01-11   點擊次數(shù):1175次

ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的機會,只需zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐,因此需經(jīng)分散才干到達反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這就是為何ELISA試劑盒反響老是需求必定時刻的溫育。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其間參加血清標本,然后在微型震動器上震動1分鐘以確保混和。加酶物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,使加液進程敏捷完結(jié)。在ELISA檢查試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA檢查試劑盒中似不恰當。
ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體的合適溫度。在樹立ELISA方法作反響動力學(xué)研討時,實驗標明,兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)品的生成可達高峰。為加快
反響,可進步反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以形成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在Elisa試劑盒中通常不予選用。
保溫的方式除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,通常均選用水浴,可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA試劑盒板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為避免蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反響板漂浮在水面上。
若用保溫箱,ELISA試劑盒板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui終將ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應(yīng)嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的請求操控溫育。室溫溫育時,ELISA試劑盒板只需平置于操作臺上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時刻應(yīng)按規(guī)則力求準確。為確保這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板一起測定。

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